細菌培養(yǎng)是一種用人工方法使細菌生長繁殖的技術。細菌在自然界中分布極廣,數量大,種類多,它可以造福人類,也可以成為致病的原因。大多數細菌可用人工方法培養(yǎng),即將其接種于培養(yǎng)基上,使其生長繁殖。培養(yǎng)出來的細菌用于研究、鑒定和應用。
細菌培養(yǎng)是一個復雜的技術。培養(yǎng)時應根據細菌種類和目的等選擇培養(yǎng)方法、培養(yǎng)基,制定培養(yǎng)條件(溫度、pH值、時間,對氧的需求與否等)。一般操作步驟為先將標本接種于固體培養(yǎng)基上,做分離培養(yǎng)。再進一步對所得單個菌落進行形態(tài)、生化及血清學反應鑒定。培養(yǎng)基常用牛肉湯、蛋白胨、氯化鈉、葡萄糖、血液等和某些細菌所需的特殊物質配制成液體、半固體、固體等。一般細菌可在有氧條件下,37℃中放18~24小時生長。厭氧菌則需在無氧環(huán)境中放2~3天后生長。個別細菌如結核菌要培養(yǎng)1個月之久。
由于細菌無處不在,因此從制備培養(yǎng)基時開始,整個培養(yǎng)過程必須按無菌操作要求進行,否則外界細菌污染標本,會導致錯誤結果;而培養(yǎng)的致病菌一旦污染環(huán)境,就會引起交叉感染。
以光合細菌培養(yǎng)方法為例。光合細菌培養(yǎng)的方法,按次序分為容器、工具的消毒,培養(yǎng)基的制備,接種和培養(yǎng)管理四個步驟。
(一)容器、工具的消毒。
(二)培養(yǎng)基的制備
1.培養(yǎng)用水
如果培養(yǎng)的光合細菌是淡水種,菌種培養(yǎng)可用蒸餾水,生產培養(yǎng)可用消毒的自來水(或井水)配制。如果培養(yǎng)的光合細菌是海水種,則用天然海水配制培養(yǎng)基,注意在海水中加入磷元素時,不能用磷酸氫二鉀,應用磷酸二氫鉀,不然會產生大量沉淀。
2.滅菌和消毒
菌種培養(yǎng)用的培養(yǎng)基應連同培養(yǎng)容器用高壓蒸氣滅菌鍋滅菌。小型生產性培養(yǎng)可把配好的培養(yǎng)液用普通鋁鍋或大型三角燒瓶煮沸消毒。大型生產性培養(yǎng)則把經沉淀砂濾后的水用漂白粉(或漂白液)消毒后使用。
3.培養(yǎng)基配制
根據所培養(yǎng)種類的營養(yǎng)需要選擇合適的培養(yǎng)基配方。按培養(yǎng)基配方把所需物質稱量,逐一溶解,混合,配成培養(yǎng)基。也可先配成母液,使用時按比例加入一定的量即可。
(三)接種培養(yǎng)基配好后,應立即進行接種。光合細菌生產性培養(yǎng)的按種量比較高,一般為20%~50%,即菌種母液量和新配培養(yǎng)液雖之比為1∶4~1∶1,不應低于20%,尤其是微氣培養(yǎng),接種量更應高些,否則光合細菌在培養(yǎng)液中很難占絕對優(yōu)勢,影響培養(yǎng)的最終產量和質量。
(四)培養(yǎng)管理光合細菌的培養(yǎng)過程中,管理工作包括日常管理操作和測試,生長情況的觀察、檢查以及出現問題的分析處理等三個方面。
培養(yǎng)成敗標準
生長情況的觀察和檢查光合細菌生長情況的好壞是培養(yǎng)成敗的標準。在培養(yǎng)過程中,可以通過觀察菌液的顏色及其變化來了解光合細菌生長繁殖的大體情況,菌液的顏色是否正常,接種后顏色是否由淺變深,均反映光合細菌是否正常生長繁殖以及繁殖速度的快慢。必要時可通過顯微鏡檢查,了解情況。